ÇOKLU DALGA BOYLU KLOROFİL II FLOROMETRE SİSTEMİ

Açıklama

ÇOK-RENKLİ-PAM II ÇOKLU DALGA BOYLU KLOROFİL II FLOROMETRE SİSTEMİ

Yeni MULTI-COLOR-PAM-II, iki oldukça farklı tekniği barındıran kompakt bir cihazdır: PAM tekniği ve tek devir flaş kinetiği (STK).

MULTI-COLOR-PAM-II Önemli Noktaları

Tek bir evde iki cihaz: modüle edilmemiş flaş analizi ve çok renkli PAM modüle edilmiş uygulamalar

PS II verici tarafını ve Car-triplet’lerin varlığını araştırmak için hızlı ölçümlerin (zaman çözünürlüğü 0,3 µs’ye kadar) eksiksiz bir portföyü ve PS II alıcı tarafını, elektron taşıma zincirini ve fotosentetik aktiviteyi araştırmak için Çok Renkli (PAM) ölçümleri.

Her iki tekniğin karıştırılması: örneğin, indüklenen floresan sinyalinin bozunma kinetiğinin, logaritmik olarak azalan bir ölçüm ışığı frekansına sahip PAM ölçüm ışığı ile izlenebildiği doyurucu 3 µs flaşların uygulanması.

Aşağıda her iki cihazın olası uygulamalarına genel bir bakış verilmiştir:

QA-kinetics up to overall Photosynthesis activity	Oxygen evolving complex up to PQ pool
Pulse-modulated fluorescence	Non-modulated fluorescence
Dark decay measurements	Pump-probe measurements
MT Pulses/continuous light	ST-flashes
Saturation pulse quenching analysis	Saturation flash quenching analysis
Regulatory fluorescence quenching (NPQ) and complementary PS II quantum yields	Short-lived fluorescence quenchers (P680+ (DQ) and Car-triplets (TQ))
Dark-to-light induction curves	ST-kinetics (STK)
Two wavelength detection FV(I)	Period-4 oscillations in FV(II)
Fast kinetics (50 µs to seconds) and Slow kinetics (seconds to hours)	Flash train-induced fluorescence changes
Sigma(II) (O-I1 rise)	Sigma(II) (FRRF emulation)
QA– re-oxidation kinetics	S-state decay
PS II quantum yield	S-state distribution
Light saturation curves (LC)	Flash saturation curves
O-I1-I2-P/OJIP transients	Wide range of ST-intensities
PS II heterogeneity	ST-widths and ST-dark intervals
Mixed use of both techniques: e.g., applying an STK during an O-I1-I2-P transient

Yeni MULTI-COLOR-PAM-II için daha fazla seçenek önemli bir anahtar kelimedir: yeni STK (tek devirli kinetik) flaş lambası ve hızlı dedektör, PS II donör tarafındaki reaksiyonları ve Car üçlülerini zaten geniş olan portföye ekler. PAM ve ST-Kinetics ölçümleri arasında hızlı geçiş, her iki tekniğin bir karışımını sunarak sinerji sağlar. Cihaz ayrıca FRRF tipi ölçümleri taklit etmek veya Ramp-Method tipi doygunluk darbeleri üretmek için yeterince esnektir.

Cihaz süspansiyonların ölçümü için tasarlanmıştı, ancak yapraklarla çalışan kişiler de unutulmamıştı. Önceki modelde, yeni cihaz için hala kullanılabilen bir yaprak klipsi vardı. Ek olarak, STK flaş lambasında bir dedektör de vardır ve yaprak ölçümleri için bağımsız bir uygulama olarak kullanılabilir.

Farklı kullanıcıların farklı ihtiyaçları olabilir. MULTI-COLOR-PAM-II, farklı yapılandırmalar sunarak buna hitap eder.

Olası yapılandırmalar:

Çok Renkli (PAM) yapılandırması: çok renkli yayıcı (MCP-II-E) ve dedektörü (MCP-II-D1 veya MCP-II-D2ST)

İki Dalga Boyu Algılama (PAM) yapılandırması (süspansiyonlar): ikinci bir dedektör (MCP-II-D1 veya MCP-II-D2ST) eklenerek örneğin < 710 nm’de (çoğunlukla PS II) ve > 700 nm’de (PS II + PS I) aynı anda floresansın algılanması sağlanır. Yakın gelecekte iki dalga boyu algılamaya izin veren bir yaprak klipsi mevcut olacaktır.

Tam yapılandırma: STK flaş lambası (maksimum flaş yoğunlukları > 1,0 mol foton m-2 s-1) ve yaklaşık 100 ns’ye kadar sinyallerin algılanmasına izin veren kombine dedektör (MCP-II-EDST + MCP-II-D2ST) Çok Renkli (PAM) yapılandırmasına eklenir. Bu, PS II donör tarafı reaksiyonlarına erişim sağlar.

Süspansiyon ölçümleri için Tekli Devir Kinetiği (STK) yapılandırması: Kombine dedektör (MCP-II-D2ST) ile birlikte STK flaş lambası (MCP-II-EDST).

Yaprak ölçümleri için Tekli Devir Kinetiği (STK) yapılandırması: Bağımsız uygulama olarak STK flaş lambası: STK flaş lambası, numune yüzeyinden floresan ölçümleri için bir dedektör içerir ve bu da onu yaprakların ölçümü için ideal hale getirir. Çok Renkli (PAM) konfigürasyonunda, kullanıcı dalga boyuna bağlı etkili PS II anten boyutu hakkında bilgilere erişebilir: Sigma(II), PS II alıcı tarafındaki reaksiyonlar (QA– yeniden oksidasyon) ve elektron taşıma zinciri boyunca elektron akışı (O-I1-I2-P/OJIP geçişleri) ancak ayrıca Doygunluk Darbesi söndürme analizi, karanlık ışık indüksiyonu ve geri kazanım eğrileri ve ışık tepki eğrileri ve bunların hepsi 5 farklı uyarma ve ölçüm ışığı dalga boyu (440, 480, 540, 590, 625 nm) artı herhangi bir kombinasyonda uygulanabilen beyaz ışık için. Bunun avantajı, örneğin diatomlarla çalışan birinin bu organizmaları yeşil renkte uyarabilmesi ve siyanobakteriler durumunda fikobilisomları uyarmak için 625 nm’yi veya çekirdek antenin klorofillerini uyarmak için 440 nm’yi seçebilmesidir.

Sadece floresan uyarımı ve tespiti için farklı dalga boyları değil, Çok Renkli (PAM) konfigürasyonu öne çıkar. Diğer önemli özellikler şunlardır:

Farklı ışık kalitelerinin yoğunluk gradyanlarının olmadığı ve dalga boyuna bağlı floresan yeniden emiliminin büyük ölçüde önlendiği optik olarak ince numunelerle ölçüm yapılmasına olanak tanıyan cihazın yüksek hassasiyeti – ışık gradyanı içermez.

Optik filtreler kullanılarak tespit dalga boylarının serbestçe seçilmesi, örneğin, PS I floresansı F(I) ile zenginleştirilmiş >700 nm floresansı ve PS II floresansı F(II) ile zenginleştirilmiş <710 nm floresansı tespitinin sağlanması, bunlar eşit koşullar altında eş zamanlı olarak ölçülebilir.

Karşılaştırmalı PAM ve flaş kinetiği (STK) ölçümleriyle belirli bir numunenin aynı durumunun karakterizasyonu.

Tetikleyici ve betik dosyaları oluşturmada neredeyse tam özgürlük, tasarlanabilen deneylerin esas olarak kullanıcının yaratıcılığıyla sınırlı olduğu anlamına gelir.

MULTI-COLOR-PAM-II’nin yeni özellikleri

MULTI-COLOR-PAM-II’nin yeni unsurları, cihazın ölçüm portföyüne yepyeni alanlar ekleyerek onu daha da çok işlevli bir florometre haline getiriyor.

Yüksek zaman çözünürlüğü: Yeni STK dedektörleri 0,3 µs zaman çözünürlüğü sağlıyor.

Zaman çözünürlüklü flaş tepkileri: MULTI-COLOR-PAM-II, doygun bir µs flaş sırasında floresan veriminin ölçülebildiği ve karotenoid üçlü söndürme (TQ) ve donör tarafına bağlı söndürmenin (DQ) ayırt edilebildiği ilk ticari olarak temin edilebilir cihazdır.

Son derece hassas: Flaş tepkilerinin ayrıntılı analizi için zamanlama çok hassas ve tekrarlanabilirdir ve flaşların biçimi bir dikdörtgene yaklaşır, LED’lerin tam yoğunluğa ulaşması yaklaşık 0,5 µs sürer. Flaş profili düzeltmesi için özel bir rutin sağlanmıştır.

Son derece yoğun flaşlar: EDST yayıcı-dedektör ünitesiyle (µs başına 1’den fazla uyarım üreten) 1000000 µmol 440 nm foton m-2 s-1’den fazla flaş yoğunlukları elde edilebilir.

Pompa-prob: Değişken karanlık aralıkları ∆t (1 µs’den 10 ms’ye) sahip çift flaş deneyleri, çeşitli söndürme biçimlerinin son derece esnek gevşeme ölçümlerine olanak tanır.

Dönem-4 salınımları: 100 Hz’e kadar (10 ms zaman aralığı) flaş frekansları, oksijen evrim kompleksinin S-durumlarını araştırmak için flaş trenleri için kullanılabilir.

Yaprak ölçümleri: Cihaz başlangıçta süspansiyon ölçümleri için tasarlanmış olsa da, EDST yayıcı-dedektör (STK-flaş lambası) ünitesi yaprakları ölçmek için tek başına da kullanılabilir. Ek olarak, çok renkli yayıcıya göre 45° açıyla iki yayıcının yerleştirildiği ve yaprakların yaydığı floresansın iki dalga boyunda algılanmasına olanak tanıyan bir yapılandırma yakında mevcut olacak.

PAM kaydına gömülü STK: Hızlı modüle edilmemiş ve PAM ölçümleri arasında hızlı geçiş [8-10 µs geçiş süresi] sayesinde bir ST, geleneksel bir şekilde herhangi bir yere yerleştirilebilir